Tam Kan Hızlı Antijen Tespit Kiti, 150-250ul Antijen Evde Test Kiti

SARS-CoV-2 Nötralize Edici Antikor Hızlı Test Kiti Yapacak IVD Tıbbi Aletiyle

Nötralize Edici Antikor Floresan Test Kiti ve Nötralize Edici Antikor Hızlı Testi

Psödovirüs-nötralize edici antikor tahlili daha önce tarif edildiği gibi yapıldı (5).Kısaca, Vero hücreleri, enfeksiyon anında bir tek tabaka üretmek için 96 oyuklu plakalara ekildi.HEK293T hücreleri transfekte edilerek önceden titre edilmiş miktarlarda rVSV-SARS-Cov-2 [phCMV3-SARS-CoV-2 spike SARS-CoV-2-psedotipli VSV-ΔG-GFP (yeşil floresan protein) üretildi, ATCC CRL-3216] inkübe edildi 96 oyuklu plakalarda birleşik Vero hücre tek tabakalarına (ATCC CCL-81) eklemeden önce 1 saat boyunca 37°C'de seri olarak seyreltilmiş insan plazması ile.Hücreler, %5 CO2 içinde 37°C'de 12 ila 16 saat süreyle inkübe edildi.2.Hücreler daha sonra %4 paraformaldehit içinde sabitlendi, 1 ug/ml Hoechst ile boyandı ve GFP ifade eden toplam hücre sayısını ölçmek için bir CellInsight CX5 görüntüleyici kullanılarak görüntülendi.Enfeksiyon, normal insan plazması ile inkübe edilmiş rVSV-SARS-CoV-2 ile enfekte olmuş ortalama hücre sayısına normalleştirildi.LOD, bir dizi maruz kalmamış kontrol denekten alınan plazma örnekleri temelinde <1:20 olarak belirlenmiştir.Negatif sinyaller 1:19 olarak ayarlandı.nötralizasyon IC50 (medyan inhibitör konsantrasyon) titreleri, GraphPad Prism 8.0'da One-Site Fit LogIC50 regresyonu kullanılarak hesaplandı.

Yüksek verimli floresan bazlı nötralizasyon testi

COVID-19 serodiagnozu ve aşı değerlendirmesi için boşluğu doldurmak için, hasta örneklerinden antikorlar tarafından bir raportör SARS-CoV-2'nin nötralizasyonunu hızlı ve güvenilir bir şekilde ölçen floresan tabanlı bir tahlil geliştirdik.Tahlil, mNG geninin viral genomun ORF7'sinde tasarlandığı stabil bir mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 üzerine inşa edildi (Şek.1 A)10.mNG SARS-CoV-2'nin tam dizisi Ek Şekil 2'de açıklanmıştır.1.Figür1b96 kuyulu formatta raportör nötralizasyon testinin akış şemasını gösterir.Test protokolü Ek Yöntemlerde ayrıntılı olarak açıklanmıştır.Kısaca, hasta serumu seri olarak seyreltildi ve raportör virüs ile inkübe edildi.37°C'de 1 saat inkübasyondan sonra, Vero CC-81 hücreleri (96 oyuklu bir plakada önceden tohumlanmış), virüs/serum karışımları ile 0,5'lik bir enfeksiyon (MOI) çokluğunda enfekte edildi.Enfeksiyondan 16 saat sonra, mNG-pozitif hücreler, yüksek içerikli bir görüntüleme okuyucusu kullanılarak ölçülmüştür (Şekil 1a).1b).Floresan hücrelerin doğru bir şekilde ölçülmesini sağlamak için mNG tahlili için Vero E6 hücreleri değil, Vero CC-81 hücrelerinin seçildiği belirtilmelidir.RT-PCR ile doğrulanmış hastalardan alınan altmış COVID-19 serum numunesi ve 60 COVID-19 olmayan serum numunesi (COVID-19 ortaya çıkmadan önce arşivlenmiştir) raportör virüs kullanılarak analiz edilmiştir.Bazı COVID-19 pozitif numuneler için viral RT-PCR pozitifliği sonrası numune toplama günleri mevcuttu ve Tabloda belirtilmiştir.​Tablo 1.1.Raportör viral enfeksiyondan sonra, hücreler serum yokluğunda yeşile döndü (Şekil 1a).1c, alt panel);aksine, raportör virüsün COVID-19 hasta serumu ile inkübasyonu floresan hücre sayısını azalttı (üst panel).Floresan hücre sayısı ile serum seyreltme katı arasında bir doz-yanıt eğrisi elde edildi (Şekil 1).1 gün ve Ek Şekil. 2), bu, floresan hücrelerin %50'sini nötralize eden seyreltme katının belirlenmesine izin verdi (NT50).Raportör testi, 24 saat içinde 120 numuneyi hızla teşhis etti: 60 COVID-19 serumunun tamamı (numune 1-60) pozitif NT gösterdi50 35 ila 5711 arasında ve 60 COVID-19 olmayan serumun tamamı (örnekler 61–120) negatif NT gösterdi50 <20 (Tablo 1).

Parametre: